A produção de hortaliças em ambiente protegido está se expandindo a cada ano em todo o mundo. O cultivo de pepino tem grande importância econômica e social, porém, são necessários o aprimoramento do sistema de produção com intuito de mitigar os custos de produção através do manejo cultura como o arranjo de plantas e técnicas de tutoria que interferem na capacidade de nutrição de plantas. O trabalho teve como objetivo analisar o índice de clorofila pelo método de SPAD, analisando as folhas de pepineiro conduzidas em ambiente protegido com dois sistemas de condução e espaçamentos diferentes. As atividades foram desenvolvidas no Instituto Federal Catarinense Campus Rio do Sul, no ambiente de produção e pesquisa do Curso de Agronomia, no mês de maio do ano de 2023 no outono/inverno. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso e arranjo fatorial (2 x 2), sendo 2 sistemas de condução (‘trançado’ e ‘trançado + latado’) e 2 espaçamentos (1,0 x 0,5 m e 1,0 x 1,0 m) e 14 plantas por bloco. A coleta de dados referente ao Índice SPAD ocorreu aos 30, 37 e 44 DAT no período da manhã, e as informações obtidas na terceira folha expandida, base, posição mediana e ápice da planta. Os dados obtidos foram submetidos a análise de variância e realizado teste de média por Scott & Knott (p<0,05). Os valores médios (ÍNDICE SPAD) para o fator espaçamento nas dimensões de 1,0 X 0,5 m nas variáveis planta total (41,90) e planta base (39,55) na fase inicial apresentaram os maiores aos 30 DAT, contudo, os valores SPAD aos 37 e 44 DAT sob os fatores (sistema de condução e espaçamento) não apresentaram diferença significativa. Os dados sobre o cultivo de pepineiro em ambiente protegido nos sistemas de condução (trançado e trançado + latado) e em diferentes espaçamentos não apresentam efeitos negativos na avaliação do índice SPAD. Palavras-chave: Cucumis sativus L. Morfofisiologia. Nitrogênio.